رنگ آميزي بافتهاي گياهي

1 - جهت بي رنگ كردن بافت گیاهی، برش­هاي تهيه شده را در آب ژاول20%  به مدت 15 الي 20 دقيقه بسته به نوع بافت از لحاظ نرم بودن آن و يا خشبي بودنش قرار داده شده تا آماده مراحل بعدي رنگ آميزي گردد.

2 -  سپس برشها را با آب مقطر شستشو داده كه مي توان به دو شيوه عمل نمود. يا بافتها را بوسيله قلم موی كوچك از شيشه ساعت محتوي آب ژاول به شيشه ساعت ديگر كه محتوي آب مقطر است انتقال داد (Passage) و يا اينكه با يك عدد قطره چكان آب ژاول را از شيشه ساعتي مذكور تخليه نمود. در صورت باقي ماندن آب ژاول در بافت گياهي، ماندگاري رنگ نمونه كم خواهد شد بدین منظور عمل شستشو با آب مقطر دوبار صورت می­پذیرد.

3 - در اين مرحله بافت هاي گياهي در اسيد استيك 10% به مدت 2 دقيقه به منظور خنثی سازی آب ژاول باقي مانده در بافت گياهي قرار داده می­شود. قابل ذکر است كه اگر بافت به مدت طولاني در اسيد استيك بماند متلاشي خواهد شد.

4 - حال بافت گياهي آماده رنگ آميزي شده و یک یک بافت­ها به مدت 5 الي 15 ثانيه در متيلن آبي قرار مي­گیرد. در اين مرحله یک برش روي قلم مو كوچك قرار داده شده و سپس به آرامي قلم مو حامل بافت به درون محلول متيلن آبي فرو برده می ­شود (5 الي 15 ثانيه). در این مرحله سريعاً بافت به شيشه ساعت محتوي آب مقطر انتقال داده می شود.

5 - در اين مرحله برش ها با آب مقطر شستشو مي­شود.

6 - كليه برش ها در الكل اتانول 70 % به مدت 3 الي 5 دقيقه  قرار داده شده تا رنگ اضافي متيلن آبي شسته شود و تنها بافت هاي چوبي و ليگنيني رنگ آبي را حفظ كند.

7 -  مجددا در اين مرحله شستشو با آب مقطر خوبي انجام می­گیرد.

8 - سپس كليه برش ها داخل محلول قرمز کنگو جهت رنگ آميزي بافت­هاي زنده و سلولزي به مدت8 تا 10  دقيقه قرار داده می­شود.

9 - در انتها برش ها  با آب مقطر فراوان شستشو می گردد.

10- حال نمونه آماده مشاهده و بررسي است. يك قطره آب مقطر روي لام  قرار داده و سپس به کمک قلم مو چند برش گیاهی روي آن گذاشته می شود. حال يك لامل به طور مورب روي لام انداخته شده تا حباب هواي كمتري بگيرد.

11 - در صورت نياز به نگهداري اين نمونه به جاي يك قطره آب مقطر از گليسيرين استفاده مي شود. جهت جلوگیری از نفوذ قارچ ها، باکتری ها، گرد و خاك اطراف لامل با لاك پوشانده می شود. اصولاً براي ماندگاري بيشتر از يك قطره چسب كانادا بالزام استفاده می شود.

12 - در انتها پس از آنكه نمونه ميكروسكوپي كاملاً خشك گرديد به داخل جعبه لام منتقل می­گردد.

طرز تهيه آب ژاول :

در آزمايشگاه جهت بيرنگ كردن بافتهاي گياهي و يا جانوري از آب ژاول استفاده ميشود . اما ميتوانيد از آب ژاول تجاري ( وايتكس ) كه به نسبت يك به پنج رقيق شده است، استفاده كنيد . براي تهيه آب ژاول به شيوه زير عمل ميكنيم :

40 گــرم كلروردشو (Ca(Clo)₂ + Cacl₂ ) و 20 گرم كربنــات سديم در يك ليتــر آب مقطر كه به مدت 10 دقيقه در دماي 50 الي 60 درجه سانتيگراد حرارت داده ميشود . سپس محلول بدست آمده را صاف ميكنيم.

H₂O + Ca(Clo)₂ + Cacl₂ + 2Na₂Co₃              2Naclo + 2Nacl + 2Caco₃

    آب ژاول

طرز تهيه محلول لوگل يا يد يدوره :

5/0 گرم يد فلزي با 1 گرم يدور پتاسيم در 100 سي سي آب مقطر ، محلول لوگل بدست مي آيد . كه يكي از معرفهاي رنگي دانه نشاسته است و آنرا به رنگ آبي تا بنفش در مي آورد.

I₂ + IK + H₂O                  محلول لوگل

طرز تهیه محلول قرمز کنگو:

یک گرم پودر آن در 100 سی سی آب مقطر حل می گردد. برای رنگ کردن بافت های سلولزی در مدت 15 دقیقه سلولز به رنگ قرمز یا نارنجی در می آید. در پایان، نمونه ها با آب مقطر و سپس الکل شستشو داده می شود.

طرز تهيه محلول كارمن زاجي:

1 گرم پودر كارمن با 5 گرم زاج سفيد ( KAL(SO₄)₂.12H₂O ) در 100 سي سي آب مقطر كه به مدت 30 دقيقه مي جوشانيم حاصل ميشود سپس بعد از 24 ساعت محلول حاصل را صاف كرده و به آن 5/0 گرم اسيد فنيك جهت جلوگيري از كپك زدن اضافه ميكنيم .

طرز تهيه محلول متيلن آبي

1 گرم پودر وردومتيل را در 1 ليتر آب مقطر حل مينمائيم .